樣品前處理方法-樣品濃縮(氮吹儀)

1. 引言

色譜分析樣品制備是一個(gè)非常重要和復(fù)雜的過(guò)程，因?yàn)樯V分析技術(shù)涉及的樣品種類繁多、樣品組成及其濃度復(fù)雜多變。樣品物理形態(tài)范圍廣泛，對(duì)采用分析方法進(jìn)行直接分析測(cè)定構(gòu)成的干擾因素特別多，所以需要選擇并實(shí)施科學(xué)有效的處理方法及其技術(shù)，達(dá)到分析測(cè)定或評(píng)價(jià)和調(diào)查的目的。現(xiàn)代色譜儀器對(duì)一個(gè)樣品的分析測(cè)定所需要的時(shí)間越來(lái)越短，但是色譜分析樣品制備過(guò)程所用的時(shí)間卻仍然很長(zhǎng)。據(jù)統(tǒng)計(jì)，在大部分的色譜分析實(shí)驗(yàn)中，將一個(gè)原始樣品處理成可直接用于色譜儀器分析測(cè)定的樣品狀態(tài)，所消耗的時(shí)間只約占整個(gè)分析時(shí)間的60%-70%，而色譜儀器測(cè)定此分析樣品的時(shí)間只約占10%，其余的時(shí)間是用于此樣品測(cè)定結(jié)果的整理和報(bào)告等。

1. 樣品前處理過(guò)程

2.1預(yù)處理

對(duì)樣品進(jìn)行粉碎、混勻和縮分等過(guò)程稱為預(yù)處理。

固體樣品——含水較低，粉碎過(guò)篩。含水量較高取食用部分切碎或先烘干后粉碎過(guò)篩。

液體、漿體——攪拌混合均勻

互不相容的液體——先分離再取樣

特殊樣品——根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求特殊處理

2.2提取

   浸提——針對(duì)固體樣品使待測(cè)組分轉(zhuǎn)移到提取液中

   萃取——針對(duì)液體樣品，利用某組分在兩種互不相容的溶劑中的分配系數(shù)不同，從一種溶劑轉(zhuǎn)移到另一種溶劑中，從而達(dá)到提取目的。

2.3凈化

   去除雜質(zhì)的過(guò)程稱為凈化。

   萃取法——適用于液體樣品，少量多次

   化學(xué)法——通過(guò)使雜質(zhì)或待測(cè)物發(fā)生化學(xué)反應(yīng)而改變其溶解性，使其與原體系分離。

   層析法——利用混合物中各組分的理化性質(zhì)（如溶解度、吸附能力、電荷、分子量、分子極性和親和力等）不同，使各組分在支持物上的移動(dòng)速度不同，而集中分布在不同區(qū)域，借此將各組分分離。

2.4濃縮

   樣品經(jīng)過(guò)提取凈化后，體積變大，待測(cè)物濃度降低，不利于檢測(cè)，所以濃縮的目的是減小樣品體積提高待測(cè)物濃度，常見(jiàn)方法如下：

常壓濃縮——適用于揮發(fā)性和沸點(diǎn)相對(duì)較低的組分，通過(guò)升高溫度，將溶劑由液態(tài)轉(zhuǎn)化成氣態(tài)被抽走或被通過(guò)冷凝器再次收集，從而達(dá)到濃縮目的。

減壓濃縮——通過(guò)抽真空，使容器內(nèi)產(chǎn)生負(fù)壓，在不改變物質(zhì)化學(xué)性質(zhì)的前提下降低物質(zhì)的沸點(diǎn)，使一些高溫下化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定或沸點(diǎn)高的溶劑在低溫下由液態(tài)轉(zhuǎn)化成氣態(tài)被抽走或被通過(guò)冷凝器再次收集。

冷凍干燥——冷凍的同時(shí)減壓抽真空，使溶劑升華，適用于生物活性樣品。

氮吹濃縮——適用于體積小、易揮發(fā)的提取液。采用惰性氣體對(duì)加熱樣液進(jìn)行吹掃，使待處理樣品迅速濃縮，達(dá)到快速分離純化的效果。該方法操作簡(jiǎn)便，尤其可以同時(shí)處理多個(gè)樣品，大大縮短了檢測(cè)時(shí)間。被廣泛應(yīng)用于農(nóng)殘檢測(cè)，制藥行業(yè)和通用研究中的樣品批量處理。

2.5 氮?dú)怃鰷u吹掃技術(shù)

該裝置采用氮?dú)庑郎u旋轉(zhuǎn)吹掃技術(shù), 樣品在一定溫度下, 通過(guò)氮?dú)獯祾?/span>, 使待測(cè)物質(zhì)獲得良好富集效果。濃縮儀由微處理器控制, 保證樣品的自動(dòng)濃縮蒸發(fā)。氣體噴嘴吹出氮?dú)饬髟跐饪s管內(nèi)形成螺旋狀氣流, 減緩了氣流沖力, 使溶劑均勻揮發(fā)且不飛濺。

2.6氮吹濃縮影響因素

適當(dāng)增加溫度能提高目標(biāo)物質(zhì)回收率。對(duì)于不同物質(zhì), 可以通過(guò)設(shè)置濃縮儀的參數(shù)適當(dāng)控制濃縮時(shí)溫度和壓力, 縮短濃縮時(shí)間, 以達(dá)到更好的回收率。

2.6.1氮?dú)饬鲏毫?duì)回收率的影響

旋渦氮吹濃縮儀氮?dú)饬髁扛淖兪峭ㄟ^(guò)調(diào)節(jié)氮?dú)膺M(jìn)口壓力實(shí)現(xiàn), 管徑不變, 流量與壓力成正比關(guān)系。氮?dú)饬鞯膲毫υ酱?/span>, 氮?dú)饬髁髁烤驮酱?。氮?dú)饬髯驳皆嚬鼙谛纬尚郎u, 溶劑接觸表面積和旋渦剪力越大, 溶劑的蒸發(fā)越快, 同時(shí)不停吹掃氮?dú)饽鼙苊馊軇┡c空氣發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。

2.6.2水浴溫度對(duì)氮?dú)饬鞯挠绊?/span>

濃縮管浸在水浴中, 通過(guò)傳熱控制濃縮管內(nèi)溶液溫度。通常水浴溫度控制范圍從30℃到60℃。溫度設(shè)定根據(jù)濃縮管里溶劑的沸點(diǎn)和被分析物質(zhì)性質(zhì)而定。水浴溫度一般要低于溶劑沸點(diǎn)溫度, 否則可能蒸發(fā)速度過(guò)快, 回收率可能降低。但是溫度設(shè)置過(guò)低, 會(huì)導(dǎo)致濃縮時(shí)間過(guò)長(zhǎng), 長(zhǎng)時(shí)間氮?dú)獯祾咭矔?huì)導(dǎo)致待測(cè)物質(zhì)揮發(fā)。在設(shè)置水浴溫度時(shí)應(yīng)充分考慮溶劑的沸點(diǎn)和揮發(fā)性。溫度高, 能縮短濃縮時(shí)間, 避免目標(biāo)物質(zhì)與空氣長(zhǎng)時(shí)間接觸, 減少目標(biāo)物質(zhì)揮發(fā), 但過(guò)高溫度會(huì)導(dǎo)致溶劑沸騰, 從而降低回收率。

2.7氮吹儀

   氮吹儀主要用于氮吹濃縮步驟，基本原理是與氮?dú)馄挎溄?，通過(guò)減壓閥

將氮?dú)馔ㄈ氲降祪x的通氣板中，然后通過(guò)通氣板上的氮吹針對(duì)樣品進(jìn)行

吹掃達(dá)到濃縮目的，并在試管底部進(jìn)行加熱用來(lái)加速溶劑的揮發(fā)。

蔬菜中26種農(nóng)藥殘留前處理及檢測(cè)方法

      文中建立蔬菜中26種有機(jī)磷、有機(jī)氯和菊酯等三大類農(nóng)藥殘留的固相萃取 -毛細(xì)管氣相色譜的快速檢測(cè)方法。

1試樣的制備

1.1 提取 　

      樣品用組織搗碎機(jī)制成勻漿狀 ,準(zhǔn)確稱取20g試樣 ,加入 50 mL乙腈 ,在勻漿機(jī)中高速勻漿1 min后濾紙過(guò)濾 ,濾液收集到裝有5～10 g氯化鈉的100 mL具塞量筒中,收集濾液,蓋上塞子,劇烈震蕩1 min,在室溫下靜置30 min,使乙腈相和水相清晰分層。

1.2　樣品凈化

1.2.1有機(jī)磷類農(nóng)藥凈化

      從 100 mL具塞量筒中吸取5.0 mL乙腈溶液 ,放入 10 mL刻度試管中 ,于氮吹儀上濃縮至近干(水浴50℃)。移取2.0 mL丙酮于刻度離心管中 ,在旋渦混合器上混勻后 ,供氣相色譜分析。

1.1.2  有機(jī)氯和菊酯類農(nóng)藥凈化

      從 100 mL具塞量筒中吸取 10.0 mL乙腈溶液 ,放入 10 mL刻度試管中 ,于氮吹儀上濃縮至近干 (水浴 50℃)，移取 2.0 mL正己烷溶解殘?jiān)?/span> ,在旋渦混合器上混勻待凈化。

      將 Florisil柱依次用 5.0 mL丙酮 /正己烷 (10: 90, v/v)5.0 mL正己烷預(yù)洗條件化 , 當(dāng)溶劑液面到達(dá)柱吸附層表面時(shí)立即加入樣品溶液 , 用 10 mL刻度離心管收集洗脫液 , 用5 mL丙酮:正己烷 (10: 90, v/v) 洗滌刻度離心管后過(guò) Floris柱 , 并重復(fù)一次。將離心管置于氮吹儀上 ,水浴溫度 50℃, 氮吹蒸發(fā)至小于 4.0 mL, 用正己烷準(zhǔn)確定容至 4.0 mL。在旋渦混合器上混勻后 , 供氣相色譜分析。

動(dòng)物源食品中激素多殘留前處理方法（GB/T 21981-2008）

1引言

根據(jù)相關(guān)報(bào)道，一些奶廠可能會(huì)經(jīng)受不住利益的誘惑在奶牛生病的情況或不孕的情況下，盲目的為了提高奶牛產(chǎn)奶量，會(huì)使用抗生素和激素等禁止的藥品。嬰幼兒食用含有激素的奶粉后可能產(chǎn)生性早熟現(xiàn)象，對(duì)嬰幼兒身體產(chǎn)生嚴(yán)重傷害。

部委托北京市疾病預(yù)防控制中心、中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)院等檢測(cè)機(jī)構(gòu)，采用通行的檢測(cè)方法(《動(dòng)物源食品中激素多殘留檢測(cè)方法 液相色譜-質(zhì)譜-質(zhì)譜法》GB/T21981-2008)對(duì)多種奶粉進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果激素含量并未超標(biāo)，但人們卻對(duì)嬰幼兒的健康保障陷入深思，有很多家長(zhǎng)已經(jīng)成了驚弓之鳥不知道該買什么樣的奶粉才能讓自己的孩子健康成長(zhǎng)，所以建立相關(guān)激素的簡(jiǎn)易檢測(cè)方法是一件既有經(jīng)濟(jì)效益又會(huì)給人類造福的事情。

2 試樣的制備

2.1 動(dòng)物肌肉、肝臟、蝦

    從所取全部樣品中取出有代表性樣品約500 g，剔除筋膜，蝦去除頭和殼。用組織搗碎機(jī)充分搗碎均勻，均分成兩份，分別裝入潔凈容器中，密封，并標(biāo)明標(biāo)記，于-18℃以下冷凍存放。

2.2 牛奶

    從所取全部樣品中取出有代表性樣品約500g，充分搖勻，均分成兩份，分別裝入潔凈容器中，密封，并標(biāo)明標(biāo)記，于0℃—4℃以下冷藏存放。

2.3 雞蛋

    從所取全部樣品中取出有代表性樣品約500 g，去殼后用組織搗碎機(jī)充分?jǐn)嚢杈鶆?，均分成兩份，分別裝入潔凈容器中，密封，并標(biāo)明標(biāo)記，于0℃—4℃以下冷藏存放。注：制樣操作過(guò)程中應(yīng)防止樣品被污染或其中的殘留物發(fā)生變化。

3 樣品提取凈化

3.1 提取

稱取5g試樣(至0.01g)于50mL具塞塑料離心管中，準(zhǔn)確加入內(nèi)標(biāo)溶液(4.15)100μL和10mL乙酸-乙酸鈉緩沖溶液，漩渦混勻，再加入β-葡萄糖醛酸酶溶液100μL于37±1℃振蕩酶解12h。取出冷卻至室溫，加入25mL甲醇超聲提取30min，0℃～4℃下10000r／min離心10min，將上清液轉(zhuǎn)入潔凈燒杯，加水100mL，混勻后待凈化。

3.2 凈化

提取液以2mL/min～3mL/min的速度上樣于活化過(guò)的ENVI-Carb國(guó)相萃取柱。將小柱減壓抽干，在將活化好的氨基柱串接在ENVI-Carb固相萃取柱的下方。用6mL二氯甲烷-甲醇溶液洗脫并收集洗脫液，取下小柱，再用2mL二氯甲烷-甲醇溶液洗氨基柱，洗脫液在微弱的氮?dú)饬飨麓蹈?，?/span>1mL甲醇-水溶液溶解殘?jiān)?，采?/span>LC-MS/MS法進(jìn)行測(cè)定。

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