二氧化碳培養(yǎng)箱的常見污染及防控措施
二氧化碳培養(yǎng)箱用途廣泛,主要用來培養(yǎng)細胞、組織和某些特殊微生物,為它們提供一個良好的體外培養(yǎng)環(huán)境,廣泛應用于細胞學實驗、微生物學實驗、組織學實驗以及分子生物學實驗。因此,二氧化碳培養(yǎng)箱的清潔維護尤為重要。
二氧化碳培養(yǎng)箱的常見污染
進入二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)環(huán)境中,對細胞生存有害的成分和造成細胞不純的異物都應視為污染。不同的污染物對細胞的影響也有差別,有的影響是長期、緩慢和潛在的,而有的則能在很短的時間內抑制細胞生長或殺死細胞。根據(jù)污染源不同主要可以分為:生物性污染、化學性污染、物理性污染和氣溶膠污染。
1、生物性污染:
這是常見也是危害大的污染。如細菌、病毒、真菌,支原體等。這些污染源有可能是人為帶入,或是細胞在放入二氧化碳培養(yǎng)箱前已經(jīng)受污染,再或者是箱體本身沒有消毒干凈。體外培養(yǎng)的細胞自身沒有抵抗污染的能力,而培養(yǎng)基中所加抗生素的抗微生物污染的能力也是有限的,因而細胞微生物污染一旦發(fā)生往往是無法挽救的。
2、化學性污染:
二氧化碳培養(yǎng)箱中許多化學物質都可以引起細胞污染。如細胞培養(yǎng)容器清洗過程中殘留的洗滌劑、加濕器中未純化的水、人為帶入的液體或氣體都可能成為化學性污染的來源。不同化學物質對細胞污染是不一樣的,有的可能促進或抑制細胞生長,有的甚至殺死細胞。
3、物理性污染:
培養(yǎng)環(huán)境中的物理因素,如溫度、放射線、振動、輻射(紫外線或熒光)會對細胞產生影響。物理性污染常常被人們所忽視,其主要是在代謝水平或分子水平上,影響細胞正常的生理過程。
4、氣溶膠污染:
氣溶膠是液體或固體微粒均勻地懸浮在氣體介質中的分散體系,當微粒是微生物時,就是微生物氣溶膠,如果這種微生物是病原性的,就是病原微生物氣溶膠。細菌、病毒等病原體通過氣溶膠可在人與人、人與環(huán)境之間傳播。
二氧化碳培養(yǎng)箱污染防控措施
1、二氧化碳培養(yǎng)箱的選擇:
二氧化碳培養(yǎng)箱的制造商們設計了多種不同的裝置去減少和防止污染的發(fā)生,其主要是防污染設計和消毒滅菌系統(tǒng)的改進,以達到消毒滅菌的目的。如帶有紫外消毒功能的二氧化碳培養(yǎng)箱、帶HEPA過濾器凈化空氣的二氧化碳培養(yǎng)箱,以及帶高溫滅菌的二氧化碳培養(yǎng)箱等,后者又分為高溫干熱和高溫濕熱兩類。這些裝置的滅菌能力各有千秋,紫外燈消毒范圍有限,距離燈越遠,或者被遮擋,消毒能力越差。
HEPA過濾器的過濾膜孔徑有限,無法去除病毒和一些微小細菌,并且容易損耗,也有其局限性。相比而言,高溫滅菌則是比較有效的方法。而高溫干熱和高溫濕熱也有所不同,不同方法的滅菌效率與溫度的高低也有著直接的關系。上海潤度生物推出的Herocell系列二氧化碳培養(yǎng)箱可進行140℃的高溫干熱滅菌,當然也可進行90℃的濕熱滅菌,為用戶的滅菌方式提供了豐富的可選擇性。
2、培養(yǎng)工作人員習慣:
人為因素和態(tài)度可以對環(huán)境、人和物起到一個正面或負面的影響。以安全為目的,實驗室內的工作人員應明白自身的態(tài)度和人為因素對實驗環(huán)境的重要性。因此,對實驗室工作人員進行專業(yè)培訓對防污染有著重要作用。
3、重視管理:
細胞室內的二氧化碳培養(yǎng)箱應由專人負責管理,定期對系統(tǒng)進行校正,至少每年一次。各項數(shù)值一旦固定后,不要隨意調節(jié),以免影響箱內溫度、濕度、CO2濃度的波動,降低機器的靈敏度,同時還會影響二氧化碳培養(yǎng)箱內的細胞生產狀態(tài)。
使用前,對二氧化碳培養(yǎng)箱的各項指標進行系統(tǒng)校正,并且對箱體和內部進行消毒處理,等各項數(shù)值穩(wěn)定一段時間后方可使用。一旦出現(xiàn)緊急問題,應及時上報,應由專業(yè)的人員進行操作,采取應對措施,以免造成不必要的損失。
4、規(guī)范操作:
二氧化碳培養(yǎng)箱的使用雖然很簡單,但同樣需要規(guī)范操作。進細胞室穿著實驗服,換上拖鞋或者穿一次性的鞋套。實驗操作時帶一次性手套,特別是打開二氧化碳培養(yǎng)箱前,先用75%的酒精噴壺噴洗雙手再開二氧化碳培養(yǎng)箱,再取出細胞培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板。顯微鏡下查看細胞培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板后,再放回二氧化碳培養(yǎng)箱時,同樣也要噴酒精消毒。
二氧化碳培養(yǎng)箱的兩個門開關取(放)物要迅速,不可長時間開著,否則會影響CO2的濃度、溫度和濕度,以及造成污染。尤其是不要忘了關好里層的玻璃門。切記開門時不要對著二氧化碳培養(yǎng)箱說話,大口呼吸或打噴嚏。
5、加強防護:
如果實驗人員生病而攜帶病菌,應帶上口罩再進細胞室,病情嚴重的則不宜進行實驗。女性同志實驗時頭發(fā)應梳起,防止皮屑污染及連帶事件的發(fā)生。如果實驗室條件允許,可以每人佩戴實驗帽、手套和口罩,以防污染二氧化碳培養(yǎng)箱及對實驗人員的自身的防護。
6、注重保養(yǎng):
二氧化碳培養(yǎng)箱置于細胞室中,室內需保持干燥,環(huán)境溫度不能超過30℃(建議保持在18℃-30℃)。二氧化碳培養(yǎng)箱放置在遠離門窗、供暖設備和空調導管的地方,不能被陽光直接照射。二氧化碳培養(yǎng)箱的放置臺面水平避震且非易燃材質,不能靠在墻壁或類似的建筑物上,其后部接電處和墻壁至少保留30cm的空間。一旦放好不宜再移動。
7、校正處理:
二氧化碳培養(yǎng)箱在放好后,再對箱體和內部進行消毒處理,并且對各項指標進行系統(tǒng)校正,等各項數(shù)值穩(wěn)定一段時間后方可使用。因CO2氣體對于健康是有害的,因此細胞室需安裝足夠的通風裝置。空氣中的粉塵氣溶膠易造成二氧化碳培養(yǎng)箱的污染,需要一個流通的空氣環(huán)境。將二氧化碳培養(yǎng)箱的管理任務分派給有經(jīng)驗的檢查人員是重要的。如長期不使用二氧化碳時,應將CO2開關關閉,防止CO2調節(jié)器失靈,避免給實驗室?guī)戆踩允录?/span>
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